為模擬人類酒精性脂肪肝等酒精攝入引起的相關(guān)疾病模型，在造模過程中發(fā)展出了多種的實驗動物酒精攝入方案，包括酒精注射、灌胃、飲水中加入酒精、酒精液體飼料等，各有優(yōu)缺點。本文主要闡述酒精液體飼料的造模方式及相關(guān)注意點。
一般，酒精性脂肪肝造模分為NIAAA急性酒精性肝損傷和酒精性脂肪肝，二者的造模方案有所區(qū)別， 這個在很多老師同學的實驗方案設計中并沒有考慮到，因而產(chǎn)生一些錯誤或誤差。
NIAAA急性酒精肝損傷的造模方法，通常為分為，過渡期、酒精液體飼料飼喂期、高度酒精灌胃造模期，過渡期之后，持續(xù)飼喂酒精液體飼料10天，然后再飼喂酒精液體飼料的同時，持續(xù)灌胃高度白酒（酒精度52度以上）三天，劑量為5 g/kg體質(zhì)量，采血，檢測相關(guān)指標
NIAAA急性酒精性肝損傷模型操作流程
慢性酒精性脂肪肝，通常在過渡期之后，持續(xù)以酒精液體飼料飼喂4-6周造模，自由采食，采血、檢測相關(guān)指標
酒精性脂肪肝常用測定指標有：血清ALT、AST的活性以及血清和肝臟中TG的含量，肝臟病理學檢查（蘇丹Ⅲ染色）、肝臟系數(shù)( % )等
關(guān)于酒精液體飼料，針對不同的應用方向，自酒精液體飼料出現(xiàn)后，設計出了較多的不同配方，其中使用最為廣泛的是由DeCarli和Lieber在20世紀60年代首先采用的在液體飼料中加入酒精來喂養(yǎng)大鼠的方法而誕生的Lieber-DeCarli（LD）酒精液體飼料，另外還有基于Ain93標準調(diào)整的Ain93M及Ain93G液體飼料等。
用于建立模擬人類飲酒的動物模型的實驗動物：有大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、雪貂、兔、微型豬、猴、狒狒，等等實驗動物，廣泛使用的是大鼠、小鼠、豚鼠等，如果是在猴、狒狒等非人靈長類動物上建模，酒精液體飼料中的酒精供能占比需要調(diào)整增高至50%以上。
經(jīng)常有同學不明白酒精液體飼料的飼喂及配置方式，在此以Lieber-DeCarli（LD）液體飼料為例進行說明：
該飼料初始狀態(tài)為含油粉末狀飼料，根據(jù)不同的配置方式，可配置出兩種液體飼料，即含酒精的酒精液體飼料組和不含酒精的對照組飼料
配置酒精液體飼料，將飼料粉末132.18g與水817.82g混合均勻后，再添加酒精50g，再次混合均勻，剩余的沒有用完的，密封冷藏
對照組，132.18g飼料粉末，添加89.6g麥芽糊精，添加778.22g水，混合均勻即可
關(guān)于酒精液體飼料的飼喂：
酒精液體飼料，因為配置完成后是一種糊狀的流體狀態(tài)，常規(guī)的水瓶容易被堵住，所以建議采購出水口帶滾珠的水瓶或者是液體飼料專用飼喂瓶，節(jié)省費用的話，可以在淘寶采購一種給寵物鳥的喂水瓶也可以使用。
關(guān)于液體飼料本身優(yōu)缺點的說明：
Lieber-DeCarli（LD）液體飼料，作為最早出現(xiàn)、應用最為廣泛的酒精性脂肪肝造模飼料，被廣泛的認可，使用最多，但本款飼料本身的脂肪供能偏高，達到了35%脂肪供能，這已經(jīng)屬于高脂飼料范疇，如果是長期的飼喂的話，對照組本身也會產(chǎn)生非酒精性脂肪肝，那么，實驗組的酒精性脂肪肝造模是酒精長期攝入引起的還是高脂肪引起的，數(shù)據(jù)可能存疑，因此，如果使用該液體飼料造模，建議再設定一組常規(guī)對照組，可以正常顆粒飼料或者Ain93標準液體對照飼料飼喂，作為交叉對比，增強數(shù)據(jù)可信度
Ain93標準液體飼料，該液體飼料是基于Ain93標注配置設計，脂肪供能符合正常飼料標準，營養(yǎng)素更為平衡，我司更為推薦以該款飼料作為實驗飼料來建立酒精性脂肪肝等相關(guān)酒精攝入引起的疾病模型的建立。
其他液體飼料，液體飼料經(jīng)過多年的發(fā)展，也發(fā)展出了應對各種需求的方案，例如高蛋白、高脂肪、營養(yǎng)素缺乏等，有具體需要可以聯(lián)系我們?yōu)槟峁┘夹g(shù)支持。
過渡期飼喂說明：
鑒于酒精液體飼料，有別于常規(guī)飼料的口感及動物本身對酒精的厭惡，需要有一個過渡區(qū)間使實驗動物接受酒精液體飼料，具體操作方法為，以一周七天為周期
第一天，使用不添加酒精的對照液體飼料，適應口感
第二天，液體飼料中添加1%無水乙醇
第三天，液體飼料中添加2%無水乙醇
第四天，液體飼料中添加3%無水乙醇
第五、六天，液體飼料中添加4%無水乙醇
第七天，換上正式的5%無水乙醇含量的酒精液體飼料
下方展示相關(guān)標準配方：
| Diet Name | 名稱 | 單位熱量值（kacl/g) | Liquid AIN-93M EtOH Diet Ain-93M液體酒精飼料 |
熱量 |
| Ingredient: | 成分 | g | kcal | |
| Casein (80 Mesh) | 酪蛋白（80目） | 4 | 38.7 | 154.80 |
| L-Cystine | L-胱氨酸 | 4 | 0.5 | 2.00 |
| Cellulose | 纖維素 | 0 | 13.8 | 0.00 |
| Xanthan Gum | 黃原膠 | 0 | 3 | 0.00 |
| Maltose Dextrin | 麥芽糖糊精 | 4 | 73.64 | 294.56 |
| Sucrose | 蔗糖 | 4 | 27.7 | 110.80 |
| Soybean Oil | 豆油(含TBHQ） | 9 | 11.102 | 99.92 |
| Mineral Mix #210052 | 混合礦物質(zhì) #210052 | 0.47 | 9.68 | 4.55 |
| Vitamin Mix #310025 | 混合維生素#310025 | 3.8 | 2.77 | 10.53 |
| Choline Bitartrate | 酒石酸膽堿 | 2 | 0.69 | 1.38 |
| 95%Ethanol | 95%酒精 | 5.35 | 67ml | 340.53 |
| Cold Water | 蒸餾水 | 0 | 補充至1升 | 0.00 |
| 合計 | 181.582 | 1019.06 |
Ain93M標準酒精性液體飼料
| Diet Name | 名稱 | 單位熱量值（kacl/g) | Liquid AIN-93G EtOH Diet AIN-93G液體酒精飼料 |
熱量 |
| Ingredient: | 成分 | g | kcal | |
| Casein (80 Mesh) | 酪蛋白（80目） | 4 | 53 | 212 |
| L-Cystine | L-胱氨酸 | 4 | 0.8 | 3.2 |
| Cellulose | 纖維素 | 0 | 13.3 | 0 |
| Xanthan Gum | 黃原膠 | 0 | 3 | 0 |
| Maltose Dextrin | 麥芽糊精 | 4 | 43.3 | 173.2 |
| Sucrose | 蔗糖 | 126.5 | 0 | |
| Soybean Oil | 豆油（含TBHQ） | 9 | 18.604 | 167.436 |
| Mineral Mix #210032 | 混合礦物質(zhì) #210032 | 0.47 | 9.28 | 4.3616 |
| Vitamin Mix #310025 | 混合維生素#310025 | 3.8 | 2.65 | 10.07 |
| Choline Bitartrate | 酒石酸膽堿 | 0 | 0.66 | 0 |
| 95%Ethanol | 95%酒精 | 5.35 | 67ml | 340.5275 |
| Cold Water | 蒸餾水 | 0 | 補充至1升 | 0 |
| 合計 | 271.094 | 910.7951 |
Ain93G標準酒精性液體飼料? Lieber-DeCarli（LD）酒精液體飼料
| L10016A | To Pre-Mix L10016A | # L10015 | To Pre-Mix L10016A | # L10016 | ||||
| kcal% | Add | kcal% | Add | kcal% | ||||
| Protein | 27 | 17 | 17 | |||||
| Carbohydrate | 17 | 47 | 11 | |||||
| Fat | 56 | 36 | 36 | |||||
| Ethanol | 36 | |||||||
| Total | 100 | 100 | 100 | |||||
| kcal/gm | 1 | 1 | ||||||
| Ingredient | gm | kcal | gm | gm | kcal | gm | gm | kcal |
| Casein | 41.4 | 166 | 41.4 | 166 | 41.4 | 166 | ||
| DL-Methionine | 0.3 | 1 | 0.3 | 1 | 0.3 | 1 | ||
| L-Cystine | 0.5 | 2 | 0.5 | 2 | 0.5 | 2 | ||
| Matodextrin 42 | 25.6 | 102 | 89.6 | 115.2 | 461 | 25.6 | 102 | |
| Cellulose | 10 | 0 | 10 | 0 | 10 | 0 | ||
| Xantham Gum | 3 | 0 | 3 | 0 | 3 | 0 | ||
| Corn Oil | 8.5 | 77 | 8.5 | 77 | 8.5 | 77 | ||
| Olive Oil | 28.4 | 256 | 28.4 | 256 | 28.4 | 256 | ||
| Safflower Oil | 2.7 | 24 | 2.7 | 24 | 2.7 | 24 | ||
| Minerals – S10018 | 8.75 | 0 | 8.75 | 0 | 8.75 | 0 | ||
| Vitamins – V10036 | 2.5 | 9 | 2.5 | 9 | 2.5 | 9 | ||
| Choline Bitartrate | 0.53 | 0.53 | 0.53 | |||||
| Ethanol, 100% | 0 | 0 | 0 | 0 | 50 | 50 | 360 | |
| H2O | 778.22 | 778.2 | 0 | 817.82 | 817.8 | 0 | ||
| TOTAL | 132.18 | 637 | 1000 | 996 | 1000 | 997 |
關(guān)于F1259液體飼料的使用說明
F1259液體飼料（粉狀），經(jīng)過特定方式的配比，可以得到液體飼料F1259SP（常用于對照組或者其他特殊實驗需求）、酒精液體飼料F1258SP（誘導酒精性脂肪肝或其他酒精性疾病）
飼喂方式為：自由采食
適應期換食的操作方法：
對照組，液體飼料F1259SP配置方式，132.83g飼料粉末+88.6g麥芽糊精（隨飼料配送）+778.57g水（40℃水溫最佳），充分攪拌均勻后裝入飼喂瓶飼喂
酒精液體飼料換食操作：
鑒于酒精液體飼料，有別于常規(guī)飼料的口感及動物本身對酒精的厭惡，需要有一個過渡區(qū)間使實驗動物接受酒精液體飼料，以一周七天為周期，具體操作方法如下：
注1：以下酒精皆為95%純度的國藥品牌酒精，酒精處于20℃左右密度為0.79，下方所有酒精質(zhì)量皆經(jīng)過換算，酒精的熱量比值為1:7.1，即1g酒精提供7.1Kcal的熱量
注2：鑒于酒精易揮發(fā)的情況，酒精液體飼料在配置時，應先將水（40℃水溫）與飼料粉末充分攪拌溶解后，降低至常溫，再加入相對應的酒精，做二次攪拌溶解，減少揮發(fā)
第一天，使用不添加酒精的對照液體飼料（132.83g飼料粉末+88.6g麥芽糊精（隨飼料配送）+778.57g水（40℃水溫最佳）），適應口感
第二天，液體飼料中添加1%無水乙醇（132.83g飼料粉末+10.5g酒精+71g麥芽糊精+785.67g水）
第三天，液體飼料中添加2%無水乙醇（132.83g飼料粉末+21g酒精+51.48g麥芽糊精+794.69g水）
第四天，液體飼料中添加3%無水乙醇（132.83g飼料粉末+31.5g酒精+32.83g麥芽糊精+802.84g水）
第五、六天，液體飼料中添加4%無水乙醇（132.83g飼料粉末+42g酒精+14.2g麥芽糊精+810.97g水）
第七天，換上正式的5%無水乙醇含量的酒精液體飼料（132.83g飼料粉末+52.63g酒精+814.54g水）
飼喂期：正式給予5%無水乙醇含量飼料，自由采食即可
其他飼喂注意事項：
- 液體飼料需要現(xiàn)用現(xiàn)配，長期儲存乙醇容易揮發(fā)
- 務必給予實驗鼠以適應期，否則很大可能出現(xiàn)拒食餓死的情況
- 酒精液體飼料因為水分含量高，能量密度較低，一般每天每只小鼠采食克重會相對常規(guī)飼料要多，預計10-15g/天（考量到酒精液體飼料的適口性），一公斤F1259粉末可以配置7-8公斤液體飼料
- 關(guān)于液體飼料分層沉淀的問題，可以在調(diào)配好飼料（乙醇不添加）后，將水溫提升至40攝氏度左右，溶解一下飼料，然后恢復至常溫后添加乙醇，混合混勻，飼喂
- 液體飼料需要用專用的飼喂瓶，一種立柱式負壓玻璃瓶，更好用且可以高壓滅菌，適用于SPF級動物房，如果是常規(guī)環(huán)境且受限于資金，可以使用寵物鳥喂水用的塑料飼喂瓶替代
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