酒精液體飼料-酒精性脂肪肝造模飼料

為模擬人類酒精性脂肪肝等酒精攝入引起的相關疾病模型,在造模過程中發展出了多種的實驗動物酒精攝入方案,包括酒精注射、灌胃、飲水中加入酒精、酒精液體飼料等,各有優缺點。本文主要闡述酒精液體飼料的造模方式及相關注意點。

一般,酒精性脂肪肝造模分為NIAAA急性酒精性肝損傷和酒精性脂肪肝,二者的造模方案有所區別, 這個在很多老師同學的實驗方案設計中并沒有考慮到,因而產生一些錯誤或誤差。

NIAAA急性酒精肝損傷的造模方法,通常為分為,過渡期、酒精液體飼料飼喂期、高度酒精灌胃造模期,過渡期之后,持續飼喂酒精液體飼料10天,然后再飼喂酒精液體飼料的同時,持續灌胃高度白酒(酒精度52度以上)三天,劑量為5 g/kg體質量,采血,檢測相關指標

NIAAA急性酒精性肝損傷模型操作流程

慢性酒精性脂肪肝,通常在過渡期之后,持續以酒精液體飼料飼喂4-6周造模,自由采食,采血、檢測相關指標

酒精性脂肪肝常用測定指標有:血清ALT、AST的活性以及血清和肝臟中TG的含量,肝臟病理學檢查(蘇丹Ⅲ染色)、肝臟系數( % )等

關于酒精液體飼料,針對不同的應用方向,自酒精液體飼料出現后,設計出了較多的不同配方,其中使用最為廣泛的是由DeCarli和Lieber在20世紀60年代首先采用的在液體飼料中加入酒精來喂養大鼠的方法而誕生的Lieber-DeCarli(LD)酒精液體飼料,另外還有基于Ain93標準調整的Ain93M及Ain93G液體飼料等。

用于建立模擬人類飲酒的動物模型的實驗動物:有大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、雪貂、兔、微型豬、猴、狒狒,等等實驗動物,廣泛使用的是大鼠、小鼠、豚鼠等,如果是在猴、狒狒等非人靈長類動物上建模,酒精液體飼料中的酒精供能占比需要調整增高至50%以上。

經常有同學不明白酒精液體飼料的飼喂及配置方式,在此以Lieber-DeCarli(LD)液體飼料為例進行說明:

該飼料初始狀態為含油粉末狀飼料,根據不同的配置方式,可配置出兩種液體飼料,即含酒精的酒精液體飼料組和不含酒精的對照組飼料

配置酒精液體飼料,將飼料粉末132.18g與水817.82g混合均勻后,再添加酒精50g,再次混合均勻,剩余的沒有用完的,密封冷藏

對照組,132.18g飼料粉末,添加89.6g麥芽糊精,添加778.22g水,混合均勻即可

關于酒精液體飼料的飼喂:

酒精液體飼料,因為配置完成后是一種糊狀的流體狀態,常規的水瓶容易被堵住,所以建議采購出水口帶滾珠的水瓶或者是液體飼料專用飼喂瓶,節省費用的話,可以在淘寶采購一種給寵物鳥的喂水瓶也可以使用。

關于液體飼料本身優缺點的說明:

Lieber-DeCarli(LD)液體飼料,作為最早出現、應用最為廣泛的酒精性脂肪肝造模飼料,被廣泛的認可,使用最多,但本款飼料本身的脂肪供能偏高,達到了35%脂肪供能,這已經屬于高脂飼料范疇,如果是長期的飼喂的話,對照組本身也會產生非酒精性脂肪肝,那么,實驗組的酒精性脂肪肝造模是酒精長期攝入引起的還是高脂肪引起的,數據可能存疑,因此,如果使用該液體飼料造模,建議再設定一組常規對照組,可以正常顆粒飼料或者Ain93標準液體對照飼料飼喂,作為交叉對比,增強數據可信度

Ain93標準液體飼料,該液體飼料是基于Ain93標注配置設計,脂肪供能符合正常飼料標準,營養素更為平衡,我司更為推薦以該款飼料作為實驗飼料來建立酒精性脂肪肝等相關酒精攝入引起的疾病模型的建立。

其他液體飼料,液體飼料經過多年的發展,也發展出了應對各種需求的方案,例如高蛋白、高脂肪、營養素缺乏等,有具體需要可以聯系我們為您提供技術支持。

過渡期飼喂說明:

鑒于酒精液體飼料,有別于常規飼料的口感及動物本身對酒精的厭惡,需要有一個過渡區間使實驗動物接受酒精液體飼料,具體操作方法為,以一周七天為周期

第一天,使用不添加酒精的對照液體飼料,適應口感

第二天,液體飼料中添加1%無水乙醇

第三天,液體飼料中添加2%無水乙醇

第四天,液體飼料中添加3%無水乙醇

第五、六天,液體飼料中添加4%無水乙醇

第七天,換上正式的5%無水乙醇含量的酒精液體飼料

下方展示相關標準配方:

Diet Name 名稱 單位熱量值(kacl/g) Liquid AIN-93M EtOH Diet
Ain-93M液體酒精飼料
熱量
Ingredient: 成分 g kcal
Casein (80 Mesh) 酪蛋白(80目) 4 38.7 154.80
L-Cystine L-胱氨酸 4 0.5 2.00
Cellulose 纖維素 0 13.8 0.00
Xanthan Gum 黃原膠 0 3 0.00
Maltose Dextrin 麥芽糖糊精 4 73.64 294.56
Sucrose 蔗糖 4 27.7 110.80
Soybean Oil 豆油(含TBHQ) 9 11.102 99.92
Mineral Mix #210052 混合礦物質 #210052 0.47 9.68 4.55
Vitamin Mix #310025 混合維生素#310025 3.8 2.77 10.53
Choline Bitartrate 酒石酸膽堿 2 0.69 1.38
95%Ethanol 95%酒精 5.35 67ml 340.53
Cold Water 蒸餾水 0 補充至1升 0.00
合計 181.582 1019.06

Ain93M標準酒精性液體飼料

Diet Name 名稱 單位熱量值(kacl/g) Liquid AIN-93G EtOH Diet
AIN-93G液體酒精飼料
熱量
Ingredient: 成分 g kcal
Casein (80 Mesh) 酪蛋白(80目) 4 53 212
L-Cystine L-胱氨酸 4 0.8 3.2
Cellulose 纖維素 0 13.3 0
Xanthan Gum 黃原膠 0 3 0
Maltose Dextrin 麥芽糊精 4 43.3 173.2
Sucrose 蔗糖 126.5 0
Soybean Oil 豆油(含TBHQ) 9 18.604 167.436
Mineral Mix #210032 混合礦物質 #210032 0.47 9.28 4.3616
Vitamin Mix #310025 混合維生素#310025 3.8 2.65 10.07
Choline Bitartrate 酒石酸膽堿 0 0.66 0
95%Ethanol 95%酒精 5.35 67ml 340.5275
Cold Water 蒸餾水 0 補充至1升 0
合計 271.094 910.7951

Ain93G標準酒精性液體飼料? Lieber-DeCarli(LD)酒精液體飼料

L10016A To Pre-Mix L10016A # L10015 To Pre-Mix L10016A # L10016
kcal% Add kcal% Add kcal%
Protein 27 17 17
Carbohydrate 17 47 11
Fat 56 36 36
Ethanol 36
Total 100 100 100
kcal/gm 1 1
Ingredient gm kcal gm gm kcal gm gm kcal
Casein 41.4 166 41.4 166 41.4 166
DL-Methionine 0.3 1 0.3 1 0.3 1
L-Cystine 0.5 2 0.5 2 0.5 2
Matodextrin 42 25.6 102 89.6 115.2 461 25.6 102
Cellulose 10 0 10 0 10 0
Xantham Gum 3 0 3 0 3 0
Corn Oil 8.5 77 8.5 77 8.5 77
Olive Oil 28.4 256 28.4 256 28.4 256
Safflower Oil 2.7 24 2.7 24 2.7 24
Minerals – S10018 8.75 0 8.75 0 8.75 0
Vitamins – V10036 2.5 9 2.5 9 2.5 9
Choline Bitartrate 0.53 0.53 0.53
Ethanol, 100% 0 0 0 0 50 50 360
H2O 778.22 778.2 0 817.82 817.8 0
TOTAL 132.18 637 1000 996 1000 997

關于F1259液體飼料的使用說明

F1259液體飼料(粉狀),經過特定方式的配比,可以得到液體飼料F1259SP(常用于對照組或者其他特殊實驗需求)酒精液體飼料F1258SP(誘導酒精性脂肪肝或其他酒精性疾病)

飼喂方式為:自由采食

適應期換食的操作方法:

對照組,液體飼料F1259SP配置方式,132.83g飼料粉末+88.6g麥芽糊精(隨飼料配送)+778.57g水(40℃水溫最佳),充分攪拌均勻后裝入飼喂瓶飼喂

酒精液體飼料換食操作:

鑒于酒精液體飼料,有別于常規飼料的口感及動物本身對酒精的厭惡,需要有一個過渡區間使實驗動物接受酒精液體飼料,以一周七天為周期,具體操作方法如下:

注1:以下酒精皆為95%純度的國藥品牌酒精,酒精處于20℃左右密度為0.79,下方所有酒精質量皆經過換算,酒精的熱量比值為1:7.1,即1g酒精提供7.1Kcal的熱量

注2:鑒于酒精易揮發的情況,酒精液體飼料在配置時,應先將水(40℃水溫)與飼料粉末充分攪拌溶解后,降低至常溫,再加入相對應的酒精,做二次攪拌溶解,減少揮發

第一天,使用不添加酒精的對照液體飼料(132.83g飼料粉末+88.6g麥芽糊精(隨飼料配送)+778.57g水(40℃水溫最佳)),適應口感

第二天,液體飼料中添加1%無水乙醇(132.83g飼料粉末+10.5g酒精+71g麥芽糊精+785.67g水)

第三天,液體飼料中添加2%無水乙醇(132.83g飼料粉末+21g酒精+51.48g麥芽糊精+794.69g水)

第四天,液體飼料中添加3%無水乙醇(132.83g飼料粉末+31.5g酒精+32.83g麥芽糊精+802.84g水)

第五、六天,液體飼料中添加4%無水乙醇(132.83g飼料粉末+42g酒精+14.2g麥芽糊精+810.97g水)

第七天,換上正式的5%無水乙醇含量的酒精液體飼料(132.83g飼料粉末+52.63g酒精+814.54g水)

飼喂期:正式給予5%無水乙醇含量飼料,自由采食即可

其他飼喂注意事項:

  • 液體飼料需要現用現配,長期儲存乙醇容易揮發
  • 務必給予實驗鼠以適應期,否則很大可能出現拒食餓死的情況
  • 酒精液體飼料因為水分含量高,能量密度較低,一般每天每只小鼠采食克重會相對常規飼料要多,預計10-15g/天(考量到酒精液體飼料的適口性),一公斤F1259粉末可以配置7-8公斤液體飼料
  • 關于液體飼料分層沉淀的問題,可以在調配好飼料(乙醇不添加)后,將水溫提升至40攝氏度左右,溶解一下飼料,然后恢復至常溫后添加乙醇,混合混勻,飼喂
  • 液體飼料需要用專用的飼喂瓶,一種立柱式負壓玻璃瓶,更好用且可以高壓滅菌,適用于SPF級動物房,如果是常規環境且受限于資金,可以使用寵物鳥喂水用的塑料飼喂瓶替代

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