直鏈淀粉/支鏈淀粉[膠淀粉]檢測試劑盒

名稱:直鏈淀粉/支鏈淀粉（膠淀粉）檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：K-AMYL
產(chǎn)品品名：直鏈/支鏈淀粉檢測試劑盒
英文品名：Amylose/Amylopectin assay Kit
規(guī)格型號：100 assays per kit
規(guī)格: 100次
產(chǎn)地:愛爾蘭
用途:用于測量谷物和面粉中直鏈淀粉/支鏈淀粉的比例和淀粉含量。
標(biāo)配:四玻璃瓶加兩個塑料瓶
在水中的溶解度:易溶
pH值:中性
氣味:無
狀態(tài):粉末和液體
保持期:10年以上（冰箱內(nèi)）

? ? ? 谷類淀粉的許多特性決定其最終用途，這些取決于直鏈淀粉/支鏈淀粉的比率。這些特性包括糊化和凝膠化，溶解度，抗性淀粉的形成以及整顆大米的烹飪和構(gòu)造特性。因此，淀粉中直鏈淀粉含量的測定是淀粉加工的一個重要的質(zhì)量參數(shù)。

? ? ? 最常用的測定谷物淀粉中直鏈淀粉含量的方法是利用電勢，電流測定或直鏈淀粉的碘結(jié)合能力比色測定直鏈淀粉-碘色合配合物。然而，這些方法具有不確定性。支鏈淀粉-碘復(fù)合物也可以形成，這樣降低了利用非比色法測定的游離碘離子的濃度，并且用比色法測量時，該復(fù)合物可能和直鏈淀粉-碘復(fù)合物吸收相同波長的光。這種復(fù)合物致使直鏈淀粉的測定含量超過實際含量，需要進行校正。Gibson等詳細(xì)列舉了使用這些方法所遇到的許多其他問題。 支鏈淀粉結(jié)合ConA的特殊復(fù)合物為淀粉中直鏈淀粉的測定提供了一種替代方法，而且不存在不確定性問題。在指定pH值，溫度和離子強度的條件下，ConA特異性結(jié)合分支多糖并形成沉淀，這種結(jié)合以多個非還原性末端基團上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基單位為基礎(chǔ)。因此，ConA可以有效結(jié)合淀粉中的支鏈淀粉成分，但是不能結(jié)合線性為主的直鏈淀粉成分。

前言:

谷類淀粉的許多特性決定其最終用途，這些取決于直鏈淀粉/支鏈淀粉的比率。這些特性包括糊化和凝膠化，溶解度，抗性淀粉的形成以及整顆大米的烹飪和構(gòu)造特性。因此，淀粉中直鏈淀粉含量的測定是淀粉加工的一個重要的質(zhì)量參數(shù)。

最常用的測定谷物淀粉中直鏈淀粉含量的方法是利用電勢，電流測定或直鏈淀粉的碘結(jié)合能力比色測定直鏈淀粉-碘色合配合物。然而，這些方法具有不確定性。支鏈淀粉-碘復(fù)合物也可以形成，這樣降低了利用非比色法測定的游離碘離子的濃度，并且用比色法測量時，該復(fù)合物可能和直鏈淀粉-碘復(fù)合物吸收相同波長的光。這種復(fù)合物致使直鏈淀粉的測定含量超過實際含量，需要進行校正。Gibson等詳細(xì)列舉了使用這些方法所遇到的許多其他問題。

支鏈淀粉結(jié)合ConA的特殊復(fù)合物為淀粉中直鏈淀粉的測定提供了一種替代方法，而且不存在不確定性問題。在指定pH值，溫度和離子強度的條件下，ConA特異性結(jié)合分支多糖并形成沉淀，這種結(jié)合以多個非還原性末端基團上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基單位為基礎(chǔ)。因此，ConA可以有效結(jié)合淀粉中的支鏈淀粉成分，但是不能結(jié)合線性為主的直鏈淀粉成分。

此方法是Yun和Matheson改進的ConA方法。分析之前用乙醇預(yù)處理去除脂質(zhì)。

直鏈淀粉/支鏈淀粉[膠淀粉]檢測試劑盒 ?原理：

淀粉樣品通過加熱完全地溶解在二甲基亞砜（DMSO）里。用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂質(zhì)，回收沉淀的淀粉。用醋酸/鹽溶液溶解沉淀的樣品，加入ConA，特異性沉淀支鏈淀粉，離心去除沉淀。單位體積上清液中的直鏈淀粉用酶水解為D-葡萄糖，然后用葡萄糖氧化酶/過氧化物酶試劑進行測定。另外一份單位體積醋酸/鹽溶液中的總淀粉同樣用酶水解為D-葡萄糖，然后加入葡萄糖氧化酶/過氧化物酶，用比色法測定。

根據(jù)ConA沉淀樣品的上清液和與總淀粉樣品中的GOPOD在510 nm處的吸光光度值之比判斷直鏈淀粉在總淀粉中的含量。

該方法適用于所有的純淀粉和谷物粉。

精確性

樣品如為純淀粉，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為<5%。

樣品如為谷物面粉，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為～10%。

Amylose/Amylopectin Kits
For the measurement of amylose/amylopectin ratio and content in cereal starches and flours. Based on a Con A precipitation procedure.

Content: 100 assays per kit

Appearance Four glass vials plus two plastic vials
Specific Gravity Not applicable
Solubility in Water Most components readily soluble.
pH Value neutral
Odour none
Form Powders and liquid.
Stability stable in a refrigerator for ten or more years
Ingredients
Name Proportion
Concanavelin A 1 vial （glass）
Amyloglucosidase/a-Amylase 1 vial （glass）
Glucose Buffer 1 vial （polypropylene）
Glucose Assay reagent 1 vial （glass）
Glucose standard and Starch reference 1 vial each （glass and plastic）

直鏈淀粉/支鏈淀粉（膠淀粉）檢測試劑盒組成成分:

瓶子1：凍干的Con A (伴刀豆球蛋白 A concanavalin A) ，200 mg，-20℃下穩(wěn)定性>5年。（玻璃）

瓶子2：淀粉葡糖苷酶（淀粉葡萄糖苷酶/α-淀粉酶）【200U，條件為消化對硝基苯基β-麥芽糖苷(也就是3300U，條件為pH4.5，40℃下消化淀粉)】加上真菌α-淀粉酶(500U ，條件為pH5.0，40℃下消化 Ceralpha 試劑)，2mL，4℃下穩(wěn)定性>5年。 ??（玻璃）

瓶子3：GOPOD 試劑緩沖液（葡萄糖緩沖液）。磷酸鉀緩沖液(1M，pH7.4)，對羥苯甲酸(0.22M)和疊氮化鈉(0.02% W/W)。4℃下穩(wěn)定性> 3年。（聚丙烯）

瓶子4：GOPOD試劑酶（葡萄糖檢測試劑 ）。葡糖氧化酶(>12,000U)加上過氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。凍干粉，-20℃下穩(wěn)定性>5年。

瓶子5：D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(5 mL,1.0mg/mL)溶于苯甲酸0.2%(w/v)。室溫下穩(wěn)定性>5年。（玻璃）

瓶子6：淀粉參考樣品(含有特定含量的直鏈淀粉)，室溫下穩(wěn)定性>5年。（塑料）

試劑制備的準(zhǔn)備：

1、用50mlCon A試劑將瓶子1中藥品溶解，分成適當(dāng)?shù)膸撞糠执娣旁诰郾┕苤校M可能在-20℃下使用或冷藏。-20℃下穩(wěn)定性>2年。

2、用20ml醋酸鈉緩沖液將瓶子2中的藥品溶解，分成適當(dāng)?shù)膸撞糠执娣旁诰郾┕苤校?/p>

3、用蒸餾水將中的藥品（GOPOD 試劑緩沖液）稀釋至1L。現(xiàn)配現(xiàn)用。

(注意：如果瓶子3意外存放在-20℃下，一些鹽可能會結(jié)晶。配制時要確保所有的結(jié)晶物質(zhì)都溶解在1L的蒸餾水中）

4、用20ml GOPOD 試劑緩沖液溶解GOPOD試劑酶，并定量的轉(zhuǎn)移到存放GOPOD 試劑緩沖液的瓶子中，用鋁箔封住瓶子，避光保存。這種試劑黑暗中保存，2-5℃下能保存大約3個月，-20℃下穩(wěn)定性大于12個月。

5、按提供的方法使用D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和淀粉參考樣品，室溫下穩(wěn)定性>5年。

安全考慮：

1、DMSO對皮膚有刺激性，用的時候要格外小心。它通過皮膚被吸收，對皮膚和眼睛都有刺激性。穿保護裝、戴手套，避免溶劑濺出。盡可能在通風(fēng)櫥中進行試驗。

2、ConA通過呼吸、皮膚接觸或攝入體內(nèi)，對人體是十分有害的。這種傷害不可逆轉(zhuǎn)，可能會致畸。在使用ConA結(jié)晶體球蛋白和含有ConA的溶劑時要穿保護裝、戴手套和特制的面具。

3、疊氮化鈉是有毒的化學(xué)試劑，必須要有專門的處理。它要添加特殊的緩沖液來充當(dāng)防腐劑。毒性通過緩沖可以被消除，但是緩沖液必須在4℃下保存。

緩沖液或溶劑：

1、乙酸鈉緩沖液（10mM,pH 4.5）

加5.9ml1.05g/ml的冰醋酸到900ml的蒸餾水中用4g/100ml的NaOH溶液調(diào)pH到4.5（大約30ml）,加0.2g疊氮化鈉，用蒸餾水定容至1L。室溫下穩(wěn)定性>2年。

2、ConA 濃縮液(600 mM, pH 6.4 乙酸鈉緩沖液)

稱取49.2g無水醋酸鈉，175.5g氯化鈉，0.5gCaCl2.2H2O ，0.7 gMgCl2.6H2O 和0.7 g MnCl2.4H2O ，用900 mL 蒸餾水將其溶解逐滴加入冰醋酸調(diào)pH為6.4，再用蒸餾水定容至1L。4℃下保存2周。（注意：配制這種復(fù)合緩沖液時，pH的調(diào)節(jié)特別重要，如果pH低于

6.4，就會有沉淀物形成，就算pH再調(diào)回來，沉淀物也不會溶解。結(jié)果會導(dǎo)致緩沖液必須丟棄重新配制。）

3、ConA 溶液（使用濃度）

將30ml ConA 濃縮液用蒸餾水稀釋至100ml。現(xiàn)配現(xiàn)用。

4、DMSO

分析純試劑。室溫下可保存5年。

預(yù)處理：淀粉樣品事先用乙醇進行預(yù)處理，除去脂質(zhì)。如果樣品沒有用乙醇進行預(yù)處理，在某些樣品中測得的直鏈淀粉含量會低50%。

實驗步驟：

A、淀粉預(yù)處理

1、準(zhǔn)確稱取淀粉或面粉樣品至10ml的樣品管中。記錄樣品重量精確到0.1mg。

2、加1ml DMSO至試管，在漩渦混合器中慢速混勻，在沸水浴中加熱直至分散（大約1分鐘）確保淀粉沒有結(jié)團結(jié)塊。

3、密封試管，高速混勻。沸水浴加熱15min，再高速間歇混勻。

4、室溫放置大約5min，加2ml 95%乙醇，混勻，再加4ml乙醇，蓋上蓋子，顛倒混勻。形成淀粉沉淀物，將試管靜止15min（條件允許過夜靜止）。

5、2000r,5min離心，棄去上清液，倒置在紙巾上10min,確保乙醇全部揮發(fā)。在接下來直鏈淀粉和淀粉的測定中使用此沉淀物。

6、加2ml DMSO到淀粉沉淀物中，將試管沸水浴15min(間或混勻)，確保沒有塊狀。

7、從沸水浴中取出試管，立即加入4ml ConA 溶液，將試管中藥品轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中。用 ConA 溶液定容。

（整個過程必須在2h內(nèi)完成）

B、支鏈淀粉- ConA 沉淀物和直鏈淀粉的測定

1、量取1mlA試劑到2ml的試管中，加0.54ml的ConA 溶液，蓋上蓋子，反復(fù)顛倒，混勻。避免樣品起泡。

2、室溫靜置1h。14000r，10min，室溫下離心。

3、轉(zhuǎn)移1ml的上清液到15ml的離心管中，，加3ml100mM醋酸鈉緩沖液，pH4.5，混合藥品。輕輕塞住管口，沸水浴5min，使ConA變性。

4、將試管在40℃下水浴，平衡5min，，加1ml淀粉轉(zhuǎn)葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物，40攝氏度下反應(yīng)30min，2000r離心5min。

5、準(zhǔn)確量取1ml上清液，加4ml GOPOD試劑，40攝氏度下反應(yīng)20min，使空白試劑和D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液同時反應(yīng)。

6、在510nm下測定每一個樣品和D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的吸光光度值。

C、總淀粉的測定

1、將0.5mlA溶液和4ml100mM乙酸鈉溶液混合，pH 4.5

2、加1ml淀粉轉(zhuǎn)葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物，40攝氏度下反應(yīng)10min，

3、準(zhǔn)確量取1ml上清液，加4ml GOPOD試劑，40攝氏度下反應(yīng)20min。這個反應(yīng)必須讓樣品和標(biāo)準(zhǔn)液按B部分同時進行。

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