細胞膜染料–DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS

產品描述

**DiR碘化物的發射波長肉眼不可見，所以需要配備CCD鏡頭或其他的近紅外檢測儀器。

Di系列染料想必大家一定不陌生，我們做細胞膜染色的時候經常會用到，今天給大家介紹下常見的4類Di染料：DiI, DiO, DiD 和 DiR，Di系列染料是一類環境敏感型親脂性膜染料，這類探針在進入細胞膜之前熒光非常弱，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質）結合時，其熒光強度顯著增強。一旦應用于細胞中，這類染料會在細胞內質膜中逐步擴散，在其最佳濃度條件下，可以擴散逐漸使整個細胞的細胞膜被染色。

 

DiI, DiO, DiD 和 DiR被激發后可以發出不同顏色的熒光，DiO和磷酯雙層膜結合后的激發光譜和發射光譜參考下圖。

 

DiO、DiI、DiD、DiR的光譜圖

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種染料的異同：

 

其中I、D、R分別代表了一個，兩個，三個雙鍵，它們是決定波長長度的關鍵，DiO, DiI, DiD 和 DiR這幾款染料的結構式如下：

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種染料的異同：

?產品優點：

1.?應用廣泛：主要作用是標記細胞膜，用于活的或固定的神經元等細胞或組織的長期示蹤劑，同時還可以標記其他疏水結構，例如外泌體

2.?不會影響細胞的生存力

3.?體外培養的條件下可以存活很長時間

4.?在經過固定的神經元細胞膜上的遷移速率為 0.2-0.6mm/day

5.?在活的神經元細胞膜上的的遷移速率為 6mm/day

關于染料的使用技巧：

1.DiI 可以溶解于無水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度約為 1-2.5mg/ml，發現較難溶解時可以適當用超聲處理以促進溶解。

2.用于細胞膜熒光標記時，DiI 的常用濃度為 1-25μM，最常用的濃度為 5-10 μM。

3.?DiI 可以直接染色活的細胞或組織，染色時間通常為 5-20 分鐘。

4.?染固定的細胞時，通常使用 4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高。

Di家族熒光染料選擇小tips：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活細胞或固定細胞及組織（請您根據您的需求選擇相應的探針），DiI比DiO熒光更亮；DiD，DiR（D12731）波長更長，更適合組織染色；

DiR應用實列賞析：

源文獻：Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model?Journal:?Scientific Reports (2017)

使用方法
1.?DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備
(1)配置DMSO或EtOH?儲存液：儲存液用?DMSO或EtOH配置濃度1～5?mM。
注意：未使用的儲存液保存在-20?oC，避免反復凍融。
(2)工作液制備：用合適的緩沖液(如：無血清培養基，HBSS或PBS)稀釋儲存液，配制濃度為1～5?μM的工作液。
注意：工作液的最終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找佳條件。
2.?懸浮細胞染色
(1)懸浮細胞密度為?1?×?106/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培養細胞 2～20分鐘，不同的細胞佳培養時間不同。
(3)染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鐘。
(4)傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37℃的培養液。
(5)重復(3)，(4)步驟兩次以上。
3.?粘壁細胞的染色
(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養。
(2)從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的環境中。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
(4)在37 ℃培養細胞 2～20分鐘，不同的細胞佳培養時間不同。
(5)吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，培養5～10分鐘，然后吸干培養基。
4.?顯微鏡檢測
(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。
(2)多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：
a)?DiI和DiO=Omega?XF52，Chroma?51004;
b)?DiI和DiD=Omega?XF92，Chroma?51007;
c)?DiI，DiO和DiD=Omega?XF93，Chroma?61005
5.?流式細胞儀的檢測
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS?染色的細胞可以分別用經典的FL1，FL2，FL3和FL4流式細胞儀檢測。

儲存條件：DiR碘化物-20℃干燥避光保存，有效期一年。

細胞膜熒光探針DiR，碘化物

DiR iodide [1，1-dioctadecyl-3，3，3，3-tetramethylindotricarbocyanine iodide]